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難溶肽純化技術(shù)

      在我們多肽生產(chǎn)純化過程中,經(jīng)常會遇到難溶的序列,這導(dǎo)致了眾多多肽公司多肽成產(chǎn)過程中收率低,難純化,成品純度不合格甚至多肽生產(chǎn)失敗等后果,這種難溶性與多肽自身的氨基酸組成及序列有密切關(guān)系,我們在多肽領(lǐng)域內(nèi)長期深入的研究,讓我們積累了大量的寶貴經(jīng)驗,保證我對于難溶肽的溶解純化保持很高的成功率和產(chǎn)品質(zhì)量。
      我們對于難溶肽的溶解總結(jié)出以下幾點:

(1)

通常整體顯酸性的多肽溶解困難時可以加入適量的堿性溶液,而顯堿性的多肽溶解困難時可以加入適量的酸性溶液;。

(2)

序列中含有大量疏水性氨基酸或中性氨基酸時,難于直接溶于水,通常需要先加入少量有機(jī)溶劑,溶解完全后用蒸餾水大量稀釋,常用的有機(jī)溶劑有乙腈,DMSO,DMF,丙醇,異丙醇等;

(3)

當(dāng)肽鏈中含有Met或者Cys時,不能用DMSO溶解,因為DMSO有氧化性,這很可能會導(dǎo)致肽鏈中含有的S被氧化;

(4)

專肽專柱:我們在開發(fā)Amyloid系列產(chǎn)品的過程中,發(fā)現(xiàn)用DMOS溶解的產(chǎn)品純化后使用的純化柱基本就不能用于其他產(chǎn)品的純化,為了保證Amyloid產(chǎn)品的穩(wěn)定,我們對于Amyloid等類似產(chǎn)品都配用了專門的純化柱。


      在不影響您實驗需求的情況下,也可以針對肽鏈的物理性質(zhì),化學(xué)性質(zhì)和分子結(jié)構(gòu),對多肽進(jìn)行修飾改變,增加其溶解性,以下是我們的建議:

(1)

修飾肽鏈中C端和N端:對于酸性肽,我們推薦C端乙?;揎?對于堿性肽,我們推薦N端氨基化修飾;

(2)

修改肽鏈中的氨基酸序列:某些序列存在大量的連續(xù)的疏水性氨基酸,例如W, F, V,I, L, M, Y ,這些疏水氨基酸在序列中大量或者連續(xù)重復(fù)出現(xiàn)時,整條肽鏈通常是難溶的,為了增強肽的極性和親水性,我們建議客戶在不影響實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,延長序列,或者通過減少疏水性氨基酸的個數(shù)來增加溶解性。

(3)

替換序列中疏水性氨基酸的殘基:在不影響實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,用可溶性的氨基酸替代序列中的疏水性氨基酸可以達(dá)到增加溶解度的效果。我們通常用Gly, Ala來替換疏水性氨基酸,一般都會取得比較好的溶解效果,這也是一種保守但有效的增強多肽溶解度的方法。

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